肠道缺血-再灌注致远隔组织损伤的信号传导机制

摘要：目的 应用不同的抗体蛋白研究小鼠肠道缺血-再灌注致远隔组织损伤时Toll样受体4(TLR4)-高迁移率族蛋白1(HMGB1)及其下游信号的传导途径.方法 SPF级雄性C57BL/6小鼠40只,采用随机数字表法分为5组:假手术组、对照组、抗HMGB1组、抗髓样细胞分化基因88 (MyD88)组和抗含诱导干扰素β的衔接蛋白(TRIF)组,每组8只.对照、抗-HMGB1、抗-MyD88和抗-TRIF组在行肠道缺血-再灌注手术前30 min分别经尾静脉注射对照IgG、HMGB1、MyD88和TRIF抗体(剂量为1 mg/kg,浓度为0.025％).所有小鼠麻醉、开腹后,除假手术组外的4组用无创血管夹夹闭肠系膜上动脉60 min后再灌注60 min,假手术组只开腹120 min,不进行缺血-再灌注.检测血浆核因子-κB(NF-κB) p65、白细胞介素6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度;肺和肠道组织形态学变化和HMGB1与NF-κB的mRNA和蛋白表达.结果 小鼠肠道缺血-再灌注损伤时,与对照组[(228.534-24.85)、(104.91±31.18)及(70.81±46.97) ng/L]比较,缺血前通过注射抗体抑制HMGB1[(145.00±33.63)、(62.28±6.73)及(52.76±5.71) ng/L]、MyD88[(191.12± 13.22)、(85.90± 17.37)及(63.19±5.47) ng/L]和TRIF[(183.73±10.81)、(78.14±7.38)及(59.70±4.63) ng/L]的表达能明显降低血浆炎症因子NF-κB(P=0.000、0.005、0.001)、IL-6 (P=0.000、0.004、0.000)及TNF-α(P=0.000、0.024、0.002)的水平,同时减轻了肺脏和小肠组织的损伤.抗-HMGB1组、抗-MyD88组和抗-TRIF组小鼠肺脏和回肠的HMGB1 mRNA(肺脏:1.89±0.18、2.35±0.31和2.29±0.28,回肠:4.93±0.55、5.96±0.73和5.76±0.51)、NF-κB mRNA(肺脏:1.42±0.23、1.77±0.18和1.70±0.13,回肠:2.23±0.55、3.11±0.38和2.99±0.24)和蛋白表达较假手术组[肺脏HMGB1mRNA (1.04±0.19) (P=0.000、0.000、0.000)、NF-κB mRNA (1.03±0.21) (P=0.004、0.000、0.000),回肠HMGB1 mRNA (1.14±0.54) (P=0.000、0.000、0.000)、NF-κB mRNA (1.03±0.23)(P=0.000、0.000、0.000)]升高,差异有统计学意义,但与对照组[肺脏HMGB1 mRNA(2.67±0.30) (P=0.000、0.035、0.016)、NF-κB mRNA (2.04±0.29) (P=0.000、0.039、0.012),回肠HMGB1 mRNA (6.70±0.66) (P=0.001、0.038、0.015)、NF-κB mRNA(3.71±0.53) (P=0.000、0.018、0.006)]相比其余3组的升高程度明显降低,其中抗-HMGB1组降低的程度为显著.抗-HMGB1抗体、抗-MyD88抗体和抗-TRIF抗体的应用能明显减轻缺血-再灌注引起的组织损伤,其中抗-HMGB1抗体的作用为显著.结论 HMGB1及其下游信号途径在小鼠肠道缺血-再灌注损伤中具有重要作用,在两条下游信号途径中,TRIF依赖途径发挥的作用比MyD88依赖途径更大些.